中国输血杂志

2018, v.31(04) 361-365

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泛素特异性蛋白酶18刺激乙型肝炎病毒复制的初步研究
Preliminary study on the role of ubiquitin specific protease 18(USP18) inthe replication of hepatitis B virus

姚敏;李玉佳;叶海艳;廖鑫忠;赵航;李世林;陈利民;

摘要(Abstract):

目的了解泛素特异性蛋白酶18(USP18)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响及其潜在机制。方法 1)USP18和Pol质粒构建:采用常规基因克隆方法,将人USP18编码序列及HBV多聚酶(Pol)编码序列分别构建到pcDNA3.1-3tag真核细胞表达载体内。2)研究Pol对USP18的影响:高表达转染Pol质粒至Hep AD38细胞内,抽提细胞内总RNA,逆转录成c DNA,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Pol对USP18的影响。3)研究USP18对HBV的影响:高表达转染USP18质粒至Hep AD38细胞内,抽提细胞内总RNA和总DNA,qRT-PCR检测USP18对HBV复制的影响。4)研究Pol与USP18之间的相互作用:将Pol质粒按一定比例转染到铺有293T细胞的10cm培养皿中,采用免疫共沉淀的方法检测Pol与USP18之间是否存在相互作用。结果成功构建USP18和Pol表达质粒,并在HepAD38细胞中高表达;过表达Pol蛋白促进USP18表达;过表达USP18刺激HBV复制;Pol与USP18存在相互作用。结论初步证明USP18可能通过与Pol相互作用促进HBV复制。

关键词(KeyWords): 泛素特异性蛋白酶18(USP18);乙型肝炎病毒;病毒复制;蛋白免疫印迹试验;实时荧光定量PCR;免疫共沉淀

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 四川省科技厅国际合作项目(2017HH0024);; 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(CAMS-2016-I2M-3-025)

作者(Author): 姚敏;李玉佳;叶海艳;廖鑫忠;赵航;李世林;陈利民;

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