中国输血杂志

2018, v.31(04) 356-361

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ThT结合试验法检测Aβ_(42)聚集情况的条件探讨
The study on conditions of ThT binding assay detecting Aβ_(42) aggregation

刘园园;杜晞;刘凤娟;林方昭;曹海军;李长清;

摘要(Abstract):

目的探讨硫黄素(ThT)结合试验法检测β-淀粉样多肽1~42(Aβ_(42))聚集情况的条件。方法 Aβ_(42)经六氟异丙醇(HFIP)单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ_(42)与ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度。分析Aβ_(42)不同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ_(42)聚集情况的影响。结果在ThT结合试验法中,Aβ_(42)孵育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以最终NH_3·H_2O 20 mmol/L的浓度加入1%NH_3·H_2O对单体化处理后的Aβ_(42)复溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以最终2%v/v(DMSO/PBS)的比例加入二甲基亚砜(DMSO)进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ_(42)更快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ_(42)由单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH_3·H_2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观。结论不同条件对ThT结合试验法检测Aβ_(42)聚集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件。

关键词(KeyWords): ThT结合试验法;β-淀粉样多肽;孵育温度;96孔板;缓冲液;复溶方式

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 四川省医学科研青年创新课题(Q15075);; 四川省医学科研课题(S16085);; 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2016-I2M-1-018)

作者(Author): 刘园园;杜晞;刘凤娟;林方昭;曹海军;李长清;

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